羊肚菌母种的组织分离技术

组织分离是一种使用子实体的特定部分分离细菌种类的方法。

由于组织分离法操作简单，不易带入杂菌，容易获得纯菌种。后代不易发生基因重组等突变，能保持原株的优良特性。因此，组织分离是目前应用最广泛的分离方法。

组织分离方法

1、选用无公害、菇形健壮的幼菇（6分钟成熟），装入消毒过的纸袋中，采摘后及时带回接种室，放入接种箱或超净工作台消毒。

2、先用75%酒精消毒双手，镊子、接种铲、刀等接种用具用酒精消毒，用酒精棉擦拭后，在酒精灯上燃烧。

3、用微干的酒精棉球擦去子囊菌柄上的灰尘或泥土，特别是基部与泥土的连接处，擦拭过程中及时更换酒精棉球。

4.羊肚菌剖开，在菌柄和菌盖交界处切出组织较厚的部分，肉质较厚的地方用处，切出2~3块菌柄为2~的组织5 毫米，用镊子夹住它，然后将纸巾放在无菌水中冲洗块，然后快速通过酒精燃烧器几次。 （过程中要少用水银升或酒精消毒，以免把羊肚菌菌丝全部杀光。）

5. 将组织块放入培养皿中，22~25避光培养。 2~3天后，新的菌丝会萌发，新的菌丝会长在培养基上。 48小时后菌丝长约0.20.4厘米，菌丝结实； 5672小时后，发芽成功的菌丝长到0.51.5厘米长，菌丝细长，无色，不致密，前端几乎完整，根系分明。此时，可挑取菌落尖进行纯化。

6、纯化后的试管应标明接种日期和种名。

7、纯化后的羊肚菌约12小时后，接种块到培养基中可见新菌丝萌发，约7天试管内长满白色菌核。约10天后，小菌核由最初的白色，逐渐变为淡黄色，变大；培养约15天后，可放入4度冰箱保存。

获得纯菌后，进行试管转移操作，1518天菌丝即可在试管中充分生长。选用菌丝旺盛、无污染的试管进行转扩，必须经出菇试验合格后方可用于生产。

羊肚菌皮薄，酒精遇水不会发芽。按照上述方法，可以进行多次试验。 （实践者需要根据实验操作调整相关细节，以上操作仅供参考。）

注：羊肚菌作为子囊菌的一种，与其他食用菌相比最大的缺点就是容易退化、变异、发霉。因此，应对分离株进行出菇试验和比较。